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BUNSEN本生ELISA試劑盒規范曲線的制作關鍵簡述2023動態已更新
閱讀次數:1068 發布時間:2023/3/31 10:22:41
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  BUNSEN本生ELISA試劑盒規范曲線的制作關鍵簡述
 

  很多試劑檢查都涉及到規范曲線的疑問,ELISA試劑盒規范曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果,乃至關系到試驗的成敗,那么究竟怎么繪制或制造規范曲線呢?本生詳述:

  一、做規范曲線樣品檢查時有幾個疑問需要注意

  1、樣品的濃度等目標是依據規范曲線計算出來的,所以先要把做規范曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事,不然后邊的試驗成果無從談起。

  2、設置規范曲線樣品的規范濃度規模要有一個對比大的跨度,而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在規范曲線濃度規模以內,人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規范曲線,盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度陡段,即曲線簡直成直線的規模內。

  3、選用倍比稀釋法制造規范曲線中的規范樣品濃度,這么就能夠確保規范樣品的濃度不會出現較大的違背。

  4、檢查規范樣品時,應按濃度遞加順序進行,以削減高濃度對低濃度的影響。

  5、規范曲線的樣品數通常為7個點,但少要確保有5個點。

  6、做出的規范曲線相數因試驗要求不一樣而有所變化,但通常來說,相數R少要大于0.98,對于有些試驗,少要0.99乃至是0.999.

  二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合

  在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程的擬合,中低濃度部分能夠用直線方程,中心部分可用對數方程,而中后段可用四參數。免疫檢查時標準點(能夠是倍比稀釋的,也能夠不是)濃度假設和相應的吸光度(OD)值假設能夠出現直線當然是抱負的了,這時能夠經過EXELL等利便的取得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。

  對于標準曲線的擬合辦法,直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反響中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部分,有的合用于半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的悉數都有較好的合用性。在一個長的區間內,Logistic應當都能擬合得較為抱負。假設用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是對比好的,而兩真個平整部分計算誤差會大,有時乃至會很大。用于免疫檢查的所謂“標準曲線"真實稱為擬合曲線對比適宜,F在上盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數邏輯擬合",用這種擬合辦法通常能夠對比的反映濃度和吸光度的曲線,從而進一步對比的取得樣品中待測物質的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這么抱負的情況,標品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線,這時就不能用直線擬合的辦法了,而對擬合辦法進行挑選即是必要的了。

  樞紐在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。當然,假設用于定量,仍是在中心一段較好。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。這些辦法當然沒有一種辦法能夠通用,但也都能夠用。但并不是說它即是的。事實上不僅是ELISA,其它良多生物學反響都是S形曲線,也都能夠用Logistic曲線擬合。

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原創作者:本生(天津)健康科技有限公司

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